Método de contagem de placas

· Alça de inoculação;

· Algodão;

· Balança analítica;

· Bico de Bunsen;

· Caldo caseína-soja;

· Espátula;

· Estante;

· Estufa;

· Fita crepe;

· Marcador permanente;

· Micropipeta calibrada;

· Placas de Petri com meios de cultura;

· Ponteiras calibradas;

· Solução salina

· Solução tampão fosfato;

· Talco em quantidade suficiente para duplicata e triplicata;

· Tubos de diluição;

· Vidro de relógio.

· Realizar testes de esterilidade nos equipamentos e materiais antes de iniciar a amostragem.

· Calibrar os equipamentos.

Preparo da amostra:

1. Pesou-se 1g de talco na balança analítica, com o auxílio de espátula e vidro de relógio

2. Mediu-se 9ml de solução tampão;

3. Colocou-se no Becker a solução tampão e o talco e homogeneizou.

Etapas do ensaio

4. Colocou-se 4 tubos identificados na estante, com 9ml de caldo caseína-soja cada.

5. Com o auxílio da micropipeta e ponteira:

- Retirou-se 1ml da solução inicial contida no Becker e colocou-se no 1º tubo.

- Retirou-se 1ml do 1º tubo e colocou-se no 2º tubo.

- Retirou-se 1ml do 2º tubo e colocou-se no 3º tubo.

- Retirou-se 1ml do 3º tubo e colocou-se no 4º tubo.

6. Tamparam-se todos os tubos com algodão.

7. Identificou-se as tampas da placa de petri, 2 placas para cada tubo: 1.1, 1.2, 2.1, 2.2, 3.1, 3.2, 4.1, 4.2;

8. Com o bico de Bunsem ligado:

- Colocou-se a ponteira na micropipeta;

- Retirou-se 1ml do 1º tubo e impregnou-se a placa 1.1.

- Flambou-se a boca do recipiente o terminar a inoculação e tampou-se

- Flambou-se a alça de inoculação (a) e fez-se a semeadura por esgotamento(b);

- Tampou-se a placa.

9. Procedeu-se da mesma forma com todos os tubos e placas.

10. Reuniram-se todas as placas de petri, envolveu-se com fita crepe e levou-se à estufa por 7 dias.

Após 7 dias na estufa, retirou-se as placas de petri semeadas e colocaram-se na bancada por ordem de semeadura.

Verificou-se que a amostragem e a duplicata não estavam equivalentes, impossibilitando a contagem fidedigna de colônias.